Los siguientes son ejemplos comunes de resultados inesperados al ejecutar los kits ELISA de Neogen con posibles explicaciones.

  1. Desarrollo de un color azul intenso con muestras y estándares.
    1. La placa no se lavó adecuadamente (3 x 300 µL) con el buffer de lavado diluido. Si utiliza una lavadora automática, asegúrese de que la máquina funcione correctamente y aumente el ciclo de lavado a 5 x 300 µL.
    2. El concentrado del conjugado enzimático fue diluido incorrectamente.

  2. Desarrollo de un color extremadamente bajo con muestras y estándares.
    1. El buffer de lavado no fue diluido correctamente antes de usarse.
    2. Se utilizó agua de mala calidad para diluir el buffer de lavado. Se debe utilizar agua desionizada para las diluciones.
    3. El concentrado del conjugado enzimático fue diluido incorrectamente.
    4. El kit se deterioró prematuramente, posiblemente debido a condiciones adversas de transporte y almacenamiento. Investigue la condición del kit cuando fue recibido y cómo fue almacenado antes de usarlo. Las condiciones de almacenamiento adecuadas son listadas en las instrucciones.
    5. El kit ha caducado. Verifique las fechas de caducidad en el kit de prueba y los reactivos. Ningún componente del kit debe utilizarse después de la fecha de vencimiento. No mezcle reactivos o componentes de un kit con los reactivos o componentes de otro kit.
    6. Contaminación. Siempre utilice técnicas asépticas al abrir y retirar los reactivos de viales y botellas. Mantenga la placa cubierta excepto cuando añada reactivos, lave o lea. Siempre use diferentes puntas de pipeta para cada reactivo. Mientras pipetea, no permita que la punta de la pipeta toque cualquiera de los reactivos que ya están en el pocillo.

  3. No hay desarrollo de color con muestras y estándares.
    1. Dilución inadecuada del concentrado de conjugado enzimático.
    2. El kit ha caducado. Verifique las fechas de caducidad en el kit de prueba y los reactivos. Ningún componente del kit debe utilizarse después de la fecha de vencimiento. No mezcle reactivos o componentes de un kit con los reactivos o componentes de otro kit.
    3. Adición incorrecta de los reactivos del kit. Revise el procedimiento del ensayo.

  4. Poco o ningún desplazamiento de la curva estándar.
    1. Dilución inadecuada de los estándares. Consulte el esquema de dilución en las instrucciones.
    2. Contaminación.
    3. La placa no se lavó adecuadamente (3 x 300 µL) con el buffer de lavado diluido. Si utiliza una lavadora automática, asegúrese de que la máquina funcione correctamente y aumente el ciclo de lavado a 5 x 300 µL.
    4. El kit se deterioró prematuramente. Contacte a su representante de Neogen Corporation e indique el nombre del kit, el número de lote, la fecha de expiración y sus lecturas de DO para una investigación más detallada.

  5. La curva estándar se realizó correctamente, pero las muestras negativas conocidas dieron un bajo desarrollo de color.
    1. Las muestras deben diluirse o extraerse para eliminar interferencias. Consulte el procedimiento de extracción en las instrucciones del kit.

  6. La curva estándar se realizó correctamente, pero las muestras extraídas dieron un bajo desarrollo de color.
    1. La concentración del analito en la muestra extraída es demasiado alta. La muestra extraída necesitará ser diluida antes de realizar el ensayo para que la lectura de la DO de la muestra se ajuste a la curva estándar. Cuando se utiliza una dilución, la concentración determinada a partir de la curva estándar debe multiplicarse por el factor de dilución.
    2. La extracción inadecuada de las muestras dando como resultado la presencia de un disolvente. Consulte el procedimiento de extracción recomendado en las instrucciones.

  7. Variabilidad con duplicados.
    1. Técnica de pipeteo inconsistente y/o inadecuada al añadir reactivos. Mejore la técnica de pipeteo.
    2. Lavado inconsistente. Los pocillos deben ser lavados 3 x 300 µL con el buffer de lavado diluido. Si utiliza una lavadora automática, asegúrese de que la máquina funcione correctamente y aumente el ciclo de lavado a 5 x 300 µL.
    3. Aspiración inadecuada durante el lavado. Los pocillos deben ser descargados y golpeados entre cada lavado. Golpee el exceso de líquido en los pocillos antes de añadir el sustrato. Añada el sustrato inmediatamente a los pocillos una vez que el exceso del buffer de lavado haya sido eliminado. Si utiliza una lavadora automática, asegúrese de que la máquina esté aspirando correctamente.
    4. Interrupción durante la configuración del ensayo. Todos los reactivos deben prepararse antes de comenzar el ensayo. La adición de reactivos debe realizarse de manera oportuna y precisa.

Si experimenta un resultado que no se ha abordado aquí, póngase en contacto con nuestro Departamento de Servicios Técnicos para obtener asistencia.

Neogen Corporation
Ciencias Biológicas, Toxicología
944 Nandino Boulevard
Lexington, KY 40511 EEUU
+1 800/477-8201 (EEUU/Canadá)
+1 859/254-1221
Correo electrónico: Esta dirección de correo electrónico está siendo protegida contra los robots de spam. Necesita tener JavaScript habilitado para poder verlo.

 

Reemplazo/Política de crédito

Neogen Corporation se complacerá en reemplazar o emitir un crédito por cualquier kit defectuoso. Solicitamos una copia de los valores de absorbancia, la plantilla correspondiente y el número de lote del kit de prueba en cuestión para determinar la causa del problema.