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Teoría del ensayo ELISA

Los ensayos ELISA competitivos directos de Neogen operan sobre la base de competencia entre el conjugado enzimático de peroxidasa de rábano picante (HRP) y el analito en la muestra por un número limitado de sitios de unión específicos en la microplaca pre-recubierta.

Procedimiento del ensayo ELISA

Primero, se añaden las muestras, estándares o calibradores a la microplaca previamente recubierta con anticuerpos. Luego, se añade el conjugado enzimático y la mezcla se incuba a temperatura ambiente. Durante la incubación, se produce la competencia por los sitios de unión en la microplaca. Después se lava la placa, eliminando todo el material no unido. El conjugado enzimático unido es detectado mediante la adición del sustrato basado en TMB.

Los resultados del ensayo ELISA pueden ser obtenidos midiendo y comparando la lectura de absorbancia de los pocillos de las muestras contra los estándares utilizando un lector de microplacas a 650 nm o a 450 nm si se usa un detenedor ácido. El grado de desarrollo del color es inversamente proporcional a la cantidad de analito en la muestra o estándar. Por ejemplo, la ausencia del analito en la muestra resultará en un color azul oscuro, mientras que la presencia de este resultará en un azul claro o incoloro a medida que aumente su concentración. Si se utiliza un detenedor ácido para interrumpir el ensayo, entonces el color azul oscuro cambiará a un color amarillo oscuro y el color azul claro a incoloro cambiará a amarillo claro o incoloro.

Procedimiento del principio del ensayo ELISA

La placa es pre-recubierta con el anticuerpo. La placa está lista para ser utilizada.
NO LAVE
Una muestra o control es añadido a cada pocillo. Luego, se añade el conjugado medicamento-enzima y la mezcla se incuba a temperatura ambiente.
Lave la placa para eliminar todos los materiales sin unir.
Los materiales unidos permanecen en la microplaca.
Añada el sustrato TMB a cada micropocillo y permita que se desarrolle el color.
Los resultados cualitativos se obtienen midiendo la lectura de absorbancia a 650 nm o a 450 nm si se usa un detenedor ácido.