Teoria do Teste ELISA

Os testes ELISA competitivo direto da Neogen operam com base na competição entre o conjugado enzimático de peroxidase de rábano (HRP) e o analito na amostra por um número limitado de sítios de ligação nos micropoços revestidos com anticorpos.

Procedimento do Teste ELISA

Amostras, padrões ou calibradores são adicionados nos micropoços revestidos com anticorpos. Em seguida, o conjugado enzimático é adicionado e a mistura é incubada em temperatura ambiente. A competição pelos sítios de ligação ocorre durante a incubação. Os micropoços são lavados e todo o material não ligado é removido. O conjugado enzimático ligado é detectado através da adição do substrato TMB.

Os resultados do teste ELISA podem ser obtidos através da medição e comparação das leituras de absorbância entre os micropoços contendo as amostras e os padrões, utilizando-se um leitor de micropoços a 650 nm ou 450 nm quando a solução ácida stop é utilizada. A extensão do desenvolvimento da cor é inversamente proporcional à quantidade de analito na amostra ou padrão. Por exemplo, a ausência do analito na amostra resultará em uma coloração azul escuro, onde a presença do analito resultará em uma coloração azul claro ou ausência de cor à medida que a concentração do analito aumenta. Se a solução ácida stop for utilizada para cessar a reação, a cor azul escuro mudará para amarelo escuro e o azul claro ou a ausência de cor mudará para amarelo claro ou incolor.

Procedimento do Princípio do Teste ELISA

Os micropoços são revestidos com anticorpos e estão prontos para serem utilizados.
NÃO LAVE.
Uma amostra ou controle é adicionado em cada micropoço. Em seguida, o conjugado enzimático é adicionado e a mistura é incubada em temperatura ambiente.
Lave os micropoços para remover todo o material não ligado.
Os materiais ligados permanecerão nos micropoços.
Adicione o substrato TMB em cada micropoço e permita que a cor se desenvolva.
Resultados qualitativos são obtidos através da medição da absorbância a 650 nm ou 450 nm se a solução ácida stop for utilizada.